Ce qui est puma heart noir nouveau dans nos résultats, c'est l'inférence d'une expansion démographique substantielle en Amérique du Sud. Il y a 8 000 ans, probablement induite par la libération d'interactions compétitives avec d'autres grands carnivores qui s'étaient éteintes lors de l'événement du Pléistocène supérieur. Nous ne voyons aucune preuve d'une expansion secondaire en Amérique du Nord, car l'ensemble de données complet reflète les résultats observés avec l'Amérique du Sud uniquement.

L'EGFR et son variant EGFRvIII activé de manière constitutive sont liés à la résistance au glioblastome en thérapie, mais les mécanismes sous-jacents de cette association restent encore flous. Nous rapportons que, dans le basket puma heart glioblastome, EGFR / EGFRvIII co-exprime paradoxalement avec le modulateur de l'apoptose régulé positivement par p53 (PUMA), un membre pro-apoptotique de la famille de protéines Bcl-2 principalement situées sur la mitochondrie.

L'EGFR / EGFRvIII se puma suede heart lie à PUMA de manière constitutive et sous stress apoptotique, puis séquestre le PUMA dans le cytoplasme. L'interaction EGFR-PUMA est indépendante de l'activation de l'EGFR et est maintenue sous inhibition de l'EGFR. Un inhibiteur de Bcl-2 / Bcl-xL qui imite l'activité de PUMA sensibilise les cellules de glioblastome exprimant EGFR / EGFRvIII à Iressa.EGFRvIII indépendante de la kinase qui conduit à la résistance aux médicaments antitumoraux.

Nous avons puma future étudié l'interaction entre PUMA et l'EGFR et son rôle potentiel dans les monothérapies mono et combinatoires ciblées sur l'EGFR. Nos résultats montrent que paradoxalement, l'EGFR et l'EGFRvIII de type sauvage coexpriment avec la protéine pro-apoptotique PUMA dans des cellules GBM, in vitro et in vivo. EGFR et EGFRvIII interagissent avec PUMA de manière constitutive et sous stress apoptotique, conduisant à la séquestration cytoplasmique de PUMA dans les cellules GBM.

Toutes les transfections ont été réalisées à l'aide de lipofectamine LTX (Invitrogen, Carlsbad, CA) et de FuGENE HD (Roche). Tous les siRNA ont été achetés auprès de Upstate / Dharmacon (Lafayette, CO) et les puma r698 séquences sont 5'-CGGACGACCUCAACGCACA-3 '(siRNA humain PUMA) et 5'-UGGUUUACAUGUCGACUAA-3' (contrôle, siRNA). L'inhibiteur de Bcl-2 / Bcl-xL, la 2-méthoxyantimycine A3 (2-MA A3), a été acheté chez BIOMOL (Plymouth Meeting, PA).

Les coupes de tissus ont été déparaffinées, déshydratées et soumises à une récupération d'antigène dans un tampon contenant de l'EDTA dans un four. L'activité de la peroxydase endogène a été bloquée avec du peroxyde d'hydrogène à 0,3% et les lames ont été incubées avec du sérum de chèvre normal à 10% pendant 30 min, puis avec un anticorps monoclonal de souris anti-EGFR (1:50; Novocastra RTU-EGFR-384) et polyclonal de lapin anti-PUMA. anticorps (1: 100;