EGFRvIII et de basket puma fenty membres pro-apoptotiques de la famille de protéines Bcl-2. Comme le montre la figure 1a, la majorité de ces lignées cellulaires co-expriment des taux élevés d'EGFR et de trois protéines pro-apoptotiques, à savoir PUMA, Bax et Bmf. En revanche, ces cellules expriment de faibles niveaux de Bad, Bim et Bok. Pour déterminer si EGFRvIII coexprimait également avec des protéines pro-apoptotiques similaires à l'EGFR, nous avons examiné trois xénogreffes de GBM portant l'EGFRvIII.

EGFRvIII interagit avec PUMA, mais pas Bax et Bmf, dans les xénogreffes GBM. Les protéines extraites de trois xénogreffes de GBM exprimant EGFRvIII, comme indiqué dans le panneau b, ont été soumises à une immunoprécipitation basket puma homme pas cher / un transfert de type Western pour déterminer l'étendue de l'interaction de EGFRvIII avec des protéines pro-apoptotiques co-exprimées. Un anticorps anti-EGFR (Ab) a été utilisé pour immunoprécipiter EGFRvIII.

Et D-317 MG) et avec EGFRvIII transfecté basket puma montante de manière stable . De manière similaire, dans trois lignées de GBM exprimant EGFR, il a été démontré que PUMA co-immunoprécipitait avec EGFR (Fig. 1d). Les IgG n'ont pas donné de signaux indiquant une spécificité d'immunoprécipitation. L'interaction EGFR-PUMA a été confirmée par IP inverse en utilisant un anticorps PUMA (Un rapport précédent avait montré que l'EGFR pouvait exister dans le cytoplasme sous une forme libre non liée à la membrane.

Ensemble, ces résultats basket puma noir indiquent que l'EGFR et l'EGFRvIII coexpriment de manière paradoxale avec des protéines pro-apoptotiques et interagissent spécifiquement avec PUMA dans le GBM humain.En utilisant une cohorte de 101 gliomes et 12 tissus cérébraux normaux, nous avons examiné les taux d'EGFR / EGFRvIII et de PUMA via l'IHC. Les résultats indiquent une corrélation positive significative entre les niveaux d'expression de EGFR / EGFRvIII et de PUMA (p = 0,039). Comme le montre la figure 2a.

l'étendue de la co-expression de EGFR / EGFRvIII-PUMA est significativement plus élevée dans les gliomes malins de haut grade (20% chez les AA et 34,1% dans les GBM) que dans les gliomes de bas grade (6,3 à 7,7%). ) et des tissus basket puma noir femme cérébraux normaux (0%). L'analyse de régression indique en outre que l'EGFR seul, PUMA seul et la co-expression EGFR / PUMA sont en corrélation significative avec le degré de gliome.La figure 2b montre deux gliomes immunocolorés représentatifs dans lesquels un GBM.

Comme le montre la figure 3a, le test TUNEL a montré que l'inactivation de PUMA rend les cellules U87MG résistantes à l'apoptose (2,5%), induites par des traitements à l'anisomycine pendant 48 heures. En revanche, les cellules U87MG transfectées avec l'ARNsi contrôle subissent une apoptose significative induite par l'anisomycine (45,5%). Dans l  analyse, les signaux jaunes fusionnés représentent l ADN fragmenté nucléaire.